枸杞（Fructus lycii）是一種可食用的茄科植物，其干制品枸杞子在本草綱目和其它書(shū)籍中均有大量記載。王嬌嬌等[1]對(duì)發(fā)表在國(guó)內(nèi)期刊上的文獻(xiàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)單味枸杞子的使用比例占到了61.1%。對(duì)于枸杞子，不同時(shí)期的中藥學(xué)家都有不同的認(rèn)識(shí)，但其明目、抗氧化效果被歷代醫(yī)學(xué)工作者所承認(rèn)[2-4]。現(xiàn)如今，隨著現(xiàn)代社會(huì)的高速發(fā)展，對(duì)枸杞子明目功效的研究被科學(xué)家們愈加重視?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)工作者研究發(fā)現(xiàn)，枸杞子中包含枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide，LBP）、葉黃素、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽等，對(duì)這些成分進(jìn)行深入研究發(fā)現(xiàn)[5-7]，這些物質(zhì)都具有抗氧化能力。在此基礎(chǔ)上，枸杞多糖被發(fā)現(xiàn)具有緩解視疲勞、抗衰老和保護(hù)DNA的作用[8-9]。馬小飛[10]研究發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖可以代償性激活體內(nèi)部分細(xì)胞中Nrf-2抗氧化通路，從而進(jìn)一步增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力，對(duì)眼組織起到保護(hù)作用，這些都為枸杞子在緩解視疲勞的研究提供了理論依據(jù)。

晶狀體是眼球中重要的屈光間質(zhì)，對(duì)光線有屈光效果，具有過(guò)濾紫外線，保護(hù)視網(wǎng)膜的作用。晶狀體后面和玻璃體接觸，光線通過(guò)晶狀體后，通過(guò)玻璃體而到達(dá)視網(wǎng)膜，最終將捕獲的光信號(hào)傳至大腦。嚴(yán)宏等[11]研究發(fā)現(xiàn)，晶狀體與視疲勞之間具有密切的關(guān)系。晶狀體內(nèi)沒(méi)有血管，它所需的營(yíng)養(yǎng)來(lái)自房水。當(dāng)房水的代謝或晶狀體囊出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)，原本透明的晶狀體會(huì)變得不透明，最終影響視力，引起視疲勞及其它眼科疾病?，F(xiàn)在緩解視疲勞的方法很多，但效果都不是十分理想。

陳艷麗等[12]研究顯示過(guò)強(qiáng)的光照會(huì)引起視力的損傷，經(jīng)常伴隨色素紊亂，并引起晶狀體渾濁及皮膚光老化現(xiàn)象。桑傳蘭等[13]研究發(fā)現(xiàn)，過(guò)強(qiáng)的光照會(huì)使肝臟功能受損，其機(jī)制可能是因?yàn)檫^(guò)強(qiáng)的光照促使體內(nèi)產(chǎn)生過(guò)量的活性氧自由基，引起蛋白質(zhì)和脂質(zhì)過(guò)氧化[14-16]，導(dǎo)致體內(nèi)肝細(xì)胞受損。為了探究枸杞子對(duì)視疲勞的緩解作用，本文擬采用枸杞子提取物為原料，以C57BL/6J小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，通過(guò)檢測(cè)晶狀體與肝臟抗氧化指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)枸杞子對(duì)視疲勞的緩解作用。

1 材料和方法

1.1 材料、試劑與儀器

基礎(chǔ)飼料、實(shí)驗(yàn)小鼠：斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司；丙二醛（malonaldehyde，MDA）試劑盒、總超氧化物歧化酶（superoxide dismutase activity，SOD）試劑盒、過(guò)氧化氫酶（catalase activity，CAT）試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase activity，GSH-Px）試劑盒、總抗氧化能力 （total antioxidant capacity，TAOC）試劑盒、三氯乙醛（純度>99%）：上海麥克林生化科技有限公司；復(fù)方托吡卡胺滴眼液：參天制藥（中國(guó)）有限公司；氧氟沙星眼膏：沈陽(yáng)興齊眼藥股份有限公司。

LS120d-Ⅱ型LED燈：深圳市愛(ài)圖仕影像器材有限公司；U-3900型紫外分光光度計(jì)：日本HITACHI公司。

1.2 枸杞子提取物來(lái)源

稱(chēng)取枸杞子（符合2015版《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)）藥材，每次提取水量為藥材體積6倍，提取3次，合并提取液，提取液濃縮得到水提物浸膏，加入適量乙醇，進(jìn)行醇沉，收集沉淀物，干燥醇沉沉淀物制得枸杞子提取物（每克枸杞子提取物相當(dāng)于枸杞子生藥3.5 g）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇

健康雄性 C57BL/6J小鼠，6 周齡，（18±1）g，許可證號(hào)為SCXK（京）2016-0002，飼養(yǎng)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[（23±2）℃，相對(duì)濕度55%～75%]。老鼠置于白色塑料籠中，每籠4只，每組3籠。動(dòng)物房從早上7點(diǎn)至晚上7點(diǎn)給予正常光照，其余時(shí)間無(wú)光照，并且為動(dòng)物提供充足的食物和水。

1.4 光損傷模型制備及動(dòng)物分組

強(qiáng)光照射在暗室內(nèi)密閉進(jìn)行，無(wú)自然光干擾。每只小鼠被單獨(dú)的放置在由亞克力透明板制成的小方格中，每個(gè)格子的長(zhǎng)、寬、高分別為 10、10、8 cm，并在光照前對(duì)小鼠眼球進(jìn)行涂抹眼藥處理，避免眼球表面由于長(zhǎng)時(shí)間光照引起脫水。將光照器懸掛于小鼠頂端50 cm處，采用垂直照射方式照射，并在與小鼠同一高度處懸掛溫度計(jì)，進(jìn)行溫度實(shí)時(shí)監(jiān)控，排除溫度升高引起小鼠眼球光熱損傷的可能。根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組小鼠在（9 000±500）Lux光強(qiáng)下，每天照射4 h，連續(xù)照射7 d，光照期間正常進(jìn)食與飲水。設(shè)立5個(gè)實(shí)驗(yàn)分組，每組12只，期間采用灌胃方式分別對(duì)5組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥，其中正常對(duì)照組和光損傷模型組每天灌胃等量的溶媒；枸杞子提取物低、中和高劑量組每天的給藥劑量分別為280、370、460 mg/kg。連續(xù)給藥8周后進(jìn)行相關(guān)的抗氧化指標(biāo)檢測(cè)。

正常組、模型組分別用NOR、MOD表示，枸杞子低劑量組、枸杞子中劑量組、枸杞子高劑量組分別用GQL、GQM、GQH 表示。

1.5 體重及攝食量記錄

體重及攝食量自給藥開(kāi)始后進(jìn)行記錄，其體重每周稱(chēng)量一次，共計(jì)8周，攝食量每天測(cè)量一次并記錄。

1.6 晶狀體中相關(guān)抗氧化能力的檢測(cè)

小鼠在脫頸處死后立即摘取眼球，在高倍顯微鏡下，將晶狀體從眼球中剝離出來(lái)，剝離過(guò)程在冰盤(pán)上進(jìn)行。加入勻漿介質(zhì)用勻漿器勻漿，4℃環(huán)境離心10min（12000r/min），收取上清液，供待檢測(cè)指標(biāo)（GSHPx、T-AOC）使用。各項(xiàng)步驟按試劑盒操作說(shuō)明書(shū)上步驟進(jìn)行。

1.7 肝組織中相關(guān)抗氧化能力指標(biāo)檢測(cè)

參照劉佳維等的研究方法[17]，將小鼠體內(nèi)取出的肝組織立即放入-80℃冰箱中保存，供待檢測(cè)生化指標(biāo)（SOD、MDA、CAT、GSH-Px）使用。制備肝組織勻漿時(shí)，取出于低溫保存的肝組織，按料液比1∶9（g/mL）加冰生理鹽水，在低溫環(huán)境下用研磨棒將離心管中的肝組織研磨成組織勻漿。4℃、3 000 r/min低溫高速離心機(jī)離心10min，取上清液備用。各項(xiàng)指標(biāo)根據(jù)試劑盒說(shuō)明檢測(cè)。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以±SD表示，P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果分析

2.1 體重與攝食量

各組小鼠體重自開(kāi)始給藥時(shí)進(jìn)行記錄。體重與攝食量見(jiàn)圖1～圖3。

圖1 起始體重記錄
Fig.1 Starting weight record

字母相同表示組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

由圖 1可知，其 NOR、MOD、GQL、GQM 和 GQH組初始體重分別為 （21.22±2.33）、（20.36±2.14）、（22.13 ±3.21）、（21.55 ±3.11）、（20.33 ±2.54） g，GQL、GQM、GQH組與MOD組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。由圖2各組小鼠的最終體重上看，GQL、GQM、GQH組較MOD組體重沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），其最終體重分別為（31.25±3.58）、（30.28±2.14）、（31.66±3.21）、（30.25±3.11）、（32.14±3.51）g。從圖 3 攝食量上看，枸杞子提取物干預(yù)組較模型組攝食量沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），NOR、MOD、GQL、GQM 和 GQH 組平均攝食量分別為（4.22±0.56）、（4.41±0.42）、（4.33±0.32）、（4.28±0.36）、（4.48±0.24）g。

2.2 晶狀體抗氧化結(jié)果分析

采用酶法對(duì)各組小鼠晶狀體的GSH-Px和TAOC活力進(jìn)行測(cè)定，各組測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

如表1所示，分析小鼠在（9 000±500）Lux的光強(qiáng)下，不同劑量的枸杞子提取物對(duì)小鼠晶狀體內(nèi)抗氧化能力的影響。從GSH-Px和T-AOC兩個(gè)抗氧化指標(biāo)上看，藥物干預(yù)組抗氧化值高于模型組，并且其活力隨著枸杞子提取物劑量的升高而升高。與模型組比較，枸杞子提取物低、中和高劑量組均顯著升高 （P＜0.05）。從表中結(jié)果可以看出，低、中、高劑量的枸杞子提取物均對(duì)光損傷小鼠晶狀體具有不同程度的抗氧化能力，并且枸杞子提取物的劑量越高，其表現(xiàn)的抗氧化效果越好。

圖2 最終體重記錄
Fig.2 Final weight record

字母相同表示組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

圖3 小鼠日均攝入量
Fig.3 Mean daily intake of mice

字母相同表示組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

表1 各組晶狀體抗氧化指標(biāo)
Table 1 Antioxidant index of lens in each group U/mg

注：上標(biāo)字母相同表示組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；字母不同表示組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

2.3 枸杞子提取物對(duì)光損傷小鼠肝組織中MDA含量的影響

各組小鼠肝組織MDA含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 枸杞子提取物對(duì)光損傷小鼠肝組織MDA含量的影響
Fig.4 Effects of the extract on MDA content in liver tissue of light-damaged mice

字母相同表示組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；字母不同表示組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

過(guò)量的光照會(huì)引起小鼠體內(nèi)產(chǎn)生大量的自由基，其中包括丙二醛、羥基、羰基以及新的自由基等，能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸。另一方面，這些物質(zhì)的過(guò)度產(chǎn)生導(dǎo)致體內(nèi)自身的抗氧化平衡體系失衡，并且對(duì)體內(nèi)細(xì)胞DNA的合成、裂解及轉(zhuǎn)錄造成損傷，從而破壞生物膜結(jié)構(gòu)，使體內(nèi)的脂類(lèi)受到不可逆損傷[18-19]。從圖4結(jié)果上看，NOR和MOD組的MDA含量分別為（1.22±0.16）nmol/mg 和（3.55±0.36）nmol/mg，說(shuō)明過(guò)強(qiáng)的光照能導(dǎo)致小鼠肝臟組織中MDA含量顯著增加，而攝入低、中、高劑量的枸杞子提取物后，與模型組相比，MDA含量分別下降14.6%、17.2%和20.8%，其中，與模型組相比較，枸杞子提取物低、中、高劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

2.4 枸杞子提取物對(duì)小鼠肝組織中SOD活力的影響

各組小鼠肝組織SOD活力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 受試物對(duì)光損傷小鼠肝組織SOD活力的影響
Fig.5 Effects of the extract on SOD activity in liver tissue of lightdamaged mice

字母相同表示組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；字母不同表示組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

SOD是一種廣泛存在于動(dòng)植物、微生物中的金屬酶，能催化生物體內(nèi)的超氧自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，從而清除O2-自由基，減緩氧化應(yīng)激引起的氧化損傷[20]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，過(guò)強(qiáng)的光照導(dǎo)致肝組織中SOD酶活力明顯降低，SOD活力由正常組的（35.7±4.88）U/mg降至模型組的（19.33±4.42）U/mg（P＜0.05），而枸杞子提取物低、中和高劑量組小鼠肝組織中的SOD活力明顯上升，分別提高31.5%、39.1%和44.7%。其中，與模型組比較，枸杞子提取物低、中和高劑量組均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

2.5 枸杞子提取物對(duì)小鼠肝組織中CAT活力的影響

各組小鼠肝組織CAT活力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖6。

圖6 受試物對(duì)光損傷小鼠肝組織CAT活力的影響
Fig.6 Effects of the extract on CAT activity of liver tissue in lightdamaged mice

字母相同表示組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；字母不同表示組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

CAT是一種過(guò)氧化氫酶，能夠有效清除體內(nèi)的過(guò)氧化氫，減緩氧化應(yīng)激引起的氧化損傷[21]。由圖6可知，過(guò)強(qiáng)的光照引起肝組織中CAT酶活力明顯降低（P＜0.05），CAT活力由正常組的（72.33±7.58）U/mg降為模型組的（22.35±2.14）U/mg。給予低、中和高劑量的枸杞子提取物連續(xù)干預(yù)8周后，小鼠肝組織中的CAT活力與模型組相比明顯上升，分別提高46.6%、53.4%和66.5%。與模型組相比，枸杞子提取物低、中和高劑量組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

2.6 枸杞子提取物對(duì)肝組織中GSH-Px活力的影響

各組小鼠肝組織GSH-Px活力測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖7。

圖7 枸杞子提取物對(duì)光損傷小鼠肝組織GSH-Px活力的影響
Fig.7 Effects of the extract on GSH-Px activity in liver tissue of light-damaged mice

字母相同表示組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；字母不同表示組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

GSH-Px是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過(guò)氧化氫分解的酶，能夠有效清除體內(nèi)的過(guò)氧化氫。它特異的催化還原型谷胱甘肽對(duì)過(guò)氧化氫的還原反應(yīng)，減緩氧化應(yīng)激引起的氧化損傷[22]。圖7結(jié)果顯示，光損傷之后導(dǎo)致肝組織中GSH-Px酶活力明顯降低，酶活力由正常組的（1 946.00±159.6）U/mg下降至（1 486±168.9）U/mg（模型組）。給予低、中和高劑量的枸杞子提取物連續(xù)干預(yù)8周后，肝組織中的GSH-Px酶活力較模型組明顯上升，分別提高11.6%、15.2%和18.7%。與模型組相比，枸杞子低、中和高劑量組均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

3 結(jié)論

本研究中使用的枸杞子提取物經(jīng)測(cè)定含有枸杞多糖。光損傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，280 mg/kg劑量的枸杞子提取物能夠明顯減輕 （9 000±500）Lux光強(qiáng)引起的氧化應(yīng)激損傷，對(duì)小鼠的視力具有一定的改善作用。通過(guò)對(duì)小鼠晶狀體中抗氧化能力的測(cè)定發(fā)現(xiàn)，低、中和高劑量的枸杞子提取物可以明顯提高GSH-Px和T-AOC活力，其抗氧化效果在干預(yù)的劑量范圍內(nèi)隨著枸杞子提取物劑量的提高而升高。通過(guò)測(cè)定肝臟的抗氧化指標(biāo)發(fā)現(xiàn)，枸杞子提取物可以明顯降低肝臟MDA含量，升高SOD、CAT和GSH-Px酶活力，且低劑量即可起效，并呈現(xiàn)出劑量依賴(lài)性。這說(shuō)明枸杞子提取物的抗氧化能力不僅體現(xiàn)在晶狀體中，還可能體現(xiàn)在其它眼組織中，說(shuō)明枸杞子提取物在體內(nèi)具有抗氧化能力。由于晶狀體的生理狀態(tài)與視疲勞有密不可分的關(guān)系，說(shuō)明枸杞子提取物具有緩解視疲勞的功效。