枸杞的傳統(tǒng)藥用部位是果實(shí)，具有悠久的開發(fā)利 用歷史。除枸杞果實(shí)以外，枸杞葉俗稱天精草，是一味重要的中藥材，具有補(bǔ)虛益精、清熱止渴、養(yǎng)肝明目之功效。近年來，大量研究表明，枸杞葉富含多糖[1]、多酚和黃酮類[2]、亞精胺和萜類[3]等多種功效成分[4-5]，并具有抗氧化[3]、預(yù)防肥胖[6]、抗炎[7]、提高免疫力[8]、預(yù)防糖尿病[9]等多種功效作用，多被用于加工制成茶葉消費(fèi)[6]，也可作為新鮮蔬菜食用，市場應(yīng)用前景廣闊。

Zhao等研究表明不同產(chǎn)地的枸杞葉酚類物質(zhì)組成差異較大[10]。但不同品種、栽培條件和加工廠家/方式下枸杞葉中的成分差異性探討較少。另外，氨基酸也是枸杞葉茶中的重要的化學(xué)成分指標(biāo)。本文通過初步分析不同生產(chǎn)廠家、品種的枸杞葉及枸杞葉/芽茶樣本的總黃酮和總多酚的含量、氨基酸含量及組成情況，旨在為枸杞葉的開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘆?。兌取?8%）：上海源葉生物科技有限公司；甲醇、無水乙醇：徐州天鴻化工有限公司；亞硝酸鈉：上海廣諾化學(xué)科技有限公司；氫氧化鈉、硝酸鋁：天津市大茂化學(xué)試劑廠；三氯化鋁：成都市科龍化工試劑廠。其它試劑均為分析純。

不同的枸杞葉及其葉/芽茶樣本信息如表1所示。枸杞葉茶指將枸杞葉/芽按照綠茶加工工藝制成的樣品，枸杞葉/芽指采摘后經(jīng)冷凍干燥制成的樣品。

表1 枸杞葉及葉茶樣品信息表
Table 1 The information of leaves tea and leaves samples from

1.2 儀器與設(shè)備

Hitachi L-8900氨基酸分析儀、BS 224 S分析天平：德國賽多利斯公司；TU-1810紫外可見分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；JP-1020全數(shù)字超聲波發(fā)生器：武漢嘉鵬電子有限公司；WHY-2往復(fù)式水浴恒溫振蕩器：常州市萬豐儀器制造有限公司。

1.3 方法

1.3.1 茶葉及枸杞葉/芽樣品提取

取各樣本200 g左右粉碎，準(zhǔn)確稱取樣品1.00 g（3個(gè)平行），分別置于250 mL平底燒瓶中，加入75%乙醇溶液50 mL，于70℃水浴中回流提取2 h，冷卻后過濾，棄濾渣，留濾液，再用75%乙醇定容至50 mL容量瓶中，4℃保存待用。

1.3.2 葉茶及枸杞葉/芽中黃酮測定

將1.3.1中提取的樣品，吸取0.5 mL，以蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)量，參考閆亞美等的方法進(jìn)行總黃酮含量的測定[11]。

1.3.3 葉茶及枸杞葉/芽中多酚測定

將1.3.1中提取的樣品，吸取1 mL以沒食子酸作為標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)量，參考閆亞美等的方法進(jìn)行總多酚含量的測定[11]。

1.3.4 氨基酸的測定

參考周志陽等[12]的氨基酸測定方法進(jìn)行測定。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理及分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 21.0軟件進(jìn)行方差分析（analysis of variance，ANOVA），采用 Ducan法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，采用因子分析進(jìn)行主成分分析（principal component analysis，PCA），所有試驗(yàn)均重復(fù) 3次。

2 結(jié)果及分析

2.1 不同來源的枸杞葉及其葉/芽茶黃酮含量分析

枸杞葉茶及枸杞葉中黃酮含量分析見圖1。

圖1 枸杞葉茶及枸杞葉中黃酮含量
Fig.1 The contents of flavonoids in leaves tea and leaves from wolfberry

不同字母表示不同樣本間差異顯著（P＜0.05）。

由圖1可知，9個(gè)樣品中，各類葉茶及枸杞葉中黃酮含量大小依次為 6、5、4、9、3、7、8、2、1 號(hào)。其中，黑果枸杞芽茶的黃酮含量顯著高于其它枸杞品種來源的芽/葉。

3個(gè)枸杞芽茶樣中，黃酮含量分別為1.18%、8.23%和6.49%，各樣品之間黃酮含量存在顯著差異。其中，黑果枸杞芽茶顯著高于其它兩個(gè)公司產(chǎn)的枸杞芽茶。3個(gè)不同葉茶含量分別為2.13%、4.91%和6.88%，三者存在顯著差異，但含量介于2%～7%之間，幅度小于芽茶中黃酮含量的幅度（1%～8%），但同一品種的枸杞葉在不同產(chǎn)區(qū)種植并加工后的黃酮含量存在差異。3個(gè)枸杞葉，包括嫩枝扦插苗的黃酮含量分別為7.59%、4.79%和3.15%。其中，黑果枸杞葉中的黃酮顯著低于寧杞1號(hào)和7號(hào)的嫩枝扦插苗和黑果枸杞芽茶。

2.2 不同來源枸杞葉及其葉/芽茶多酚含量分析

枸杞葉茶及枸杞葉中多酚含量分析見圖2。

圖2 枸杞葉茶及枸杞葉中多酚含量
Fig.2 The contents of polyphenols in leaves tea and leaves from wolfberry

不同字母表示不同樣本間差異顯著（P＜0.05）。

由圖2可知，9個(gè)樣品中，各類葉茶及枸杞葉中多酚含量大小依次為 6、5、2、4、1、7、3、8、9 號(hào)。黑果枸杞芽茶的多酚含量顯著高于其它枸杞品種來源的芽/葉或枸杞葉。多酚是茶葉中的主要功效成分，具有多種保健作用[13-14]，由此可見，黑果枸杞芽茶具有較高的利用價(jià)值。

3個(gè)枸杞芽茶樣，多酚含量分別為10.37%、14.73%和3.57%，各樣品之間多酚含量存在顯著差異。其中，黑果枸杞芽茶顯著高于其它3個(gè)公司產(chǎn)的枸杞芽茶（1號(hào)～4號(hào)、9號(hào)樣本）。3個(gè)不同葉茶含量分別為12.61%、8.47%和12.52%，三者存在顯著差異，但含量介于8.47%～12.61%之間，幅度小于芽茶中多酚含量的幅度（3%～14%）。3個(gè)枸杞葉，包括嫩枝扦插苗的多酚含量分別為13.5%、9.66%和8.16%。其中，黑果枸杞葉中的黃酮顯著低于寧杞1號(hào)和7號(hào)的嫩枝扦插苗和黑果枸杞芽茶。

9個(gè)樣品中，各樣品黃酮和多酚除個(gè)別樣品外，黃酮含量和多酚含量樣本間均存在顯著差異。該結(jié)果揭示，生產(chǎn)工藝、品種、栽培條件等可能均影響枸杞葉茶的黃酮和多酚的含量；且除黑果枸杞芽茶外，寧杞1號(hào)和寧杞7號(hào)的嫩枝扦插苗也可作為良好的富含酚類物質(zhì)的枸杞葉茶加工原料。除9號(hào)樣品多酚含量小于黃酮含量外，其它樣品的多酚含量均高于黃酮含量。該結(jié)果表明，多數(shù)枸杞葉茶除黃酮外，還富含有其它類物質(zhì)的酚類化合物，其組成和結(jié)構(gòu)及其樣品之間的差異性有待于進(jìn)一步研究探討。

2.3 不同來源枸杞葉及其葉/芽茶氨基酸含量分析

2.3.1 不同來源枸杞葉及其葉/芽茶氨基酸含量的分析

不同來源枸杞葉及其葉/芽茶的氨基酸含量如表2所示。

表2 不同枸杞葉及葉茶中氨基酸含量（n=3）
Table 2 The contents of amino acids in leaves and leaves tea from wolfberry（n=3） %

不同枸杞葉及其葉/芽茶中均檢測到17種氨基酸，其中，包括7種必需氨基酸，蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和賴氨酸，以及10種非必需氨基酸，天冬氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、組氨酸、精氨酸。9種樣品中均沒有檢測到色氨酸。其中，含量最高的必需氨基酸為亮氨酸，含量最高的非必需氨基酸為天冬氨酸和谷氨酸，這與周志陽等[12]的研究結(jié)果較為一致。除茶氨酸外，谷氨酸和天冬氨酸是重要的鮮味氨基酸[15-16]，枸杞芽/葉富含谷氨酸和天冬氨酸賦予了其作為茶葉的良好原料的滋味源。

2.3.2 不同來源枸杞葉及其葉/芽茶氨基酸含量的主成分分析

對(duì)不同枸杞葉及其葉/芽茶的17種氨基酸進(jìn)行主成分分析，可以觀察到組間樣本的總體分布趨勢，得分圖和載荷圖如圖3和圖4所示。

圖3 不同來源枸杞葉及葉茶氨基酸含量的載荷圖
Fig.3 Loading diagram of amino acids contents in different wolfberry leaves or leaves tea

圖4 不同來源枸杞葉及葉茶氨基酸含量的得分圖
Fig.4 Score chart of amino acids contents in different wolfberry leaves or leaves tea

第一主成分對(duì)總變異的貢獻(xiàn)率為76.5%，第二主成分對(duì)總變異的貢獻(xiàn)率為11.5%，這兩個(gè)主成分包含了樣本88.0%的信息，能夠充分覆蓋樣本的信息。從圖3可以看出，除天冬氨酸以外，其他16種氨基酸均分布在載荷圖的左側(cè)，說明這16種氨基酸的相關(guān)性較大。圖 4 中，2、3、5、6、9 號(hào)樣品分布在得分圖的左側(cè)，1、4、7、8 號(hào)樣品分布在得分圖的右側(cè)。表明，2、3、5、6、9號(hào)樣品的的氨基酸含量高于1、4、7、8號(hào)樣品。表明，樣本中的氨基酸含量差異較大。比較而言，2和3號(hào)來自同一家種植生產(chǎn)廠家，表明枸杞品種因素對(duì)氨基酸的含量具有影響；較黑果枸杞芽而言，成齡黑果枸杞樹葉氨基酸含量較低，不利于茶葉加工；此外，寧杞1號(hào)氨基酸含量較優(yōu)于寧杞7號(hào)，可見，品種差異對(duì)枸杞葉茶加工中的氨基酸指標(biāo)貢獻(xiàn)較大，進(jìn)而影響其茶的滋味品質(zhì)。

3 結(jié)論

黑果枸杞芽茶多酚和黃酮含量顯著高于其它各樣本，并富含較高的氨基酸。除個(gè)別樣品外，黃酮和多酚黃酮含量和多酚含量樣本間均存在顯著差異，且多酚含量均高于黃酮含量。不同品種和栽培條件下的枸杞葉及葉茶的黃酮、多酚、氨基酸含量與組成差異較大。此外，除黑果枸杞芽茶外，寧杞1號(hào)和寧杞7號(hào)的嫩枝扦插苗也可作為良好的富含酚類物質(zhì)的資源加以開發(fā)利用。